The influence of growth time on the identification of Bartonella henselae strains by MALDI-TOF mass spectrometry

ABSTRACT Bartonella spp. are bacteria responsible for neglected diseases worldwide. Bartonella henselae is the species most associated with human infections. It is associated with a large spectrum of clinical manifestations and is potentially fatal. The identification of Bartonella spp. is considered a challenge in clinical routine. These bacteria are fastidious, and the time required to isolate them varies from one to six weeks. MALDI-TOF mass spectrometry has emerged as an application for research on Bartonella spp. , and has still been little explored. We investigated whether three different B. henselae strains with different growth times—14 and 28 days—could be correctly identified by MALDI-TOF mass spectra fingerprint comparison and matching. We found that the spectra from strains with different growth times do not match each other, leading to misidentification. We suggest creating database entries with multiple spectra from strains with different growth times to increase the chances of accurate identification of Bartonella spp. by MALD-TOF MS.

The influence of glycerol upon L. reuteri activity against enteropathogens / A influência do glicerol sobre a atividade de L. Reuteri contra enteropatógenos

BACKGROUND: Probiotics containing L. reuteri are popular for treating and preventing bacterial gastrointestinal infections. L. reuteri, produces reuterin, an antibiotic that inhibits gram-negative bacteria. Reuterin production is the result of glycerol fermentation by L reuteri. Although L. reuteri is normally present in the gastrointestinal system, only small amounts of glycerol are usually available; therefore, the production of reuterin may not occur and this could reduce the effectiveness of the probiotic supplement. Our objective is to identify the minimum concentrations of glycerol required for L. reuteri to exert an inhibitory effect on enteropathogenic enterobacteriaceae. METHOD: Samples containing 10(8) colony forming units (CFU) of L. reuteri DSM17938 (Colikids®, Ache, Brazil/BioGaia, Sweden) were grown with varying concentrations of glycerol (0.05-5%). 10(6) CFU of E.coli (CDC0126/INCQS/FIOCRUZ), Shigella flexneri (ATCC/120022), S. enterica (ATCC6539) and Y. enterocolitica (ATCC9610) were inoculated with L. reuteri in the different glycerol concentrations. Each enterobacteria and glycerol 5% without L. reuteri cultures were used as positive control groups. RESULTS: All bacteria were completely inhibited at higher ranges of glycerol concentrations (0.2-5%) and grew at lower concentrations (0.05-0.1%). CONCLUSION: L. reuteri requires at least 0.2% of glycerol to completely inhibit enterobacterial growth. These preliminary findings may influence the current method of use of probiotic supplements. The antibiotic activity of L. reuteri may have potential clinical use against important enteropathogens.

CONTEXTO: Os probióticos que contêm L. reuteri são populares para tratar e prevenir infecções bacterianas do trato gastrointestinal. L. reuteri produz reuterina, um antibiótico que inibe bactérias gram-negativas. A produção de reuterina depende da presença de quantidades adequadas de glicerol, cuja fermentação resulta na produção do antibiótico. Embora L. reuteri esteja normalmente presente no sistema GI, apenas pequenas quantidades de glicerol estão geralmente disponíveis; portanto, a produção de reuterina pode não ocorrer o que poderia reduzir a eficácia do suplemento probiótico. Nosso objetivo é identificar as concentrações mínimas de glicerol necessárias para que L. reuteri exerça um efeito inibitório nas enterobacteriaceas enteropatogênicas. MÉTODO: 108 CFU de L. reuteri DSM17938 (Colikids®, Ache, Brasil / BioGaia, Suécia) cresceu com concentrações variáveis de glicerol (0,05-5%). Foram inoculadas 106 UFC de E. coli (CDC0126 / INCQS / FIOCRUZ), Shigella flexneri (ATCC / 120022), S. enterica (ATCC6539) e Y. enterocolitica (ATCC9610) com L. reuteri nas diferentes concentrações de glicerol. Cada enterobacteria e glicerol 5% sem culturas de L. reuteri foram utilizadas como grupos de controle positivo. RESULTADOS: Todas as bactérias foram completamente inibidas em maiores concentrações de glicerol (0.2-5%) e cresceram em concentrações mais baixas (0.05-0.1%). CONCLUSÃO: L. reuteri requer pelo menos 0,2% de glicerol para inibir completamente o crescimento de enterobacteria. Essas descobertas preliminares podem influenciar o método atual de uso de suplementos de probióticos. A atividade antibiótica de L. reuteri pode ter potencial uso clínico contra importantes enteropatógenos.

Frasier syndrome: four new cases with unusual presentations / Síndrome de Frasier: quatro novos casos com apresentação atípica

Frasier syndrome (FS) is characterized by gonadal dysgenesis and nephropathy. It is caused by specific mutations in the Wilms' tumor suppressor gene (WT1) located in 11p23. Patients with the 46,XY karyotype present normal female genitalia with streak gonads, and have higher risk of gonadal tumor, mainly, gonadoblastoma. Therefore, elective bilateral gonadectomy is indicated. Nephropathy in FS consists in nephrotic syndrome (NS) with proteinuria that begins early in childhood and progressively increases with age, mainly due to nonspecific focal and segmental glomerular sclerosis (FSGS). Patients are generally unresponsive to steroid and immunosuppressive therapies, and will develop end-stage renal failure (ESRF) during the second or third decade of life. We report here four cases of FS diagnosis after identification of WT1 mutations. Case 1 was part of a large cohort of patients diagnosed with steroid-resistant nephrotic syndrome, in whom the screening for mutations within WT1 8-9 hotspot fragment identified the IVS9+5G>A mutation. Beside FS, this patient showed unusual characteristics, such as urinary malformation (horseshoe kidney), and bilateral dysgerminoma. Cases 2 and 3, also bearing the IVS9+5G>A mutation, and case 4, with IVS9+1G>A mutation, were studied due to FSGS and/or delayed puberty; additionally, patients 2 and 4 developed bilateral gonadal tumors. Since the great majority of FS patients have normal female external genitalia, sex reversal is not suspected before they present delayed puberty and/or primary amenorrhea. Therefore, molecular screening of WT1 gene is very important to confirm the FS diagnosis. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(8):525-32.

A síndrome de Frasier (SF), caracterizada por disgenesia gonadal e nefropatia, é causada por mutações específicas no gene supressor do tumor de Wilms (WT1) localizado em 11p23. Pacientes com cariótipo 46,XY apresentam genitália feminina normal com gônadas disgenéticas e alto risco de tumor gonadal, principalmente o gonadoblastoma. Por isso, a gonadectomia bilateral eletiva está indicada. A nefropatia na SF consiste de síndrome nefrótica com proteinúria que se inicia na infância e aumenta progressivamente com a idade, principalmente devido à glomeruloesclerose focal e segmentar (GESF). Esses pacientes não respondem ao tratamento com esteroides e imunossupressores e desenvolverão insuficiência renal crônica durante a segunda ou terceira década de vida. Neste trabalho, são relatados quatro casos de SF cujo diagnóstico foi definido após o rastreamento molecular do gene WT1. O caso 1 faz parte de um grande grupo de pacientes que tiveram diagnóstico de síndrome nefrótica corticorresistente e no qual o rastreamento de mutações no fragmento 8-9 do gene WT1 identificou a mutação IVS9+5G>A. Além da SF, essa paciente apresentou características incomuns, tais como malformação urinária (rins em ferradura) e disgerminoma bilateral. Os casos 2 e 3 também apresentaram a mutação IVS9+5G>A, e, no caso 4, foi identificada a mutação IVS9+1G>A, sendo que esses três casos foram encaminhados para estudo molecular em decorrência de GESF e/ou atraso no desenvolvimento puberal. Além disso, as pacientes 2 e 4 desenvolveram tumor gonadal bilateral. Visto que a maioria dos pacientes com SF apresenta genitália externa feminina, não há suspeita de sexo reverso até apresentarem atraso puberal e/ou amenorreia primária. Portanto, o rastreamento molecular do gene WT1 é de fundamental importância para se confirmar o diagnóstico de SF. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(8):525-32.